Калий фосфатный буфер


Калий-фосфатный буфер - Справочник химика 21

    Калий-фосфатный буфер — 0,1 М раствор, pH 7,4. [c.28]

    Калий-фосфатный буфер, pH 7,4. . . 3,0 2,8 [c.32]

    Калий-фосфатный буфер — 10 мМ раствор, pH 7,5. [c.277]

    Калий-фосфатный буфер — 20 мМ раствор, pH 6,5. [c.264]

    Натрий-фосфатный или калий-фосфатный буфер — 0,05 М растворы, содержащие 0,05 М КС1, pH 6,5. [c.107]

    Алкогольдегидрогеназа — 1 Е/мл, свежеприготовленный раствор на 0,1%-ном растворе бычьего сывороточного альбумина в 10 мМ калий-фосфатном буфере, pH 7,5. [c.277]

    Хроматографирование на ДЭАЭ-целлюлозе. Часть центрифугата предыдущей стадии (400—500 мг белка) наносят на колонку ДЭАЭ-целлюлозы (3,0X5,5 см), уравновешенную 5 мМ калий-фосфатным буфером, pH 7,7. Такой же буфер используют и для элюции, собирая фракции по 5 мл со скоростью 1 мл/мин. Определяют в них белок и транскетолазную активность. Фракции с высокой удельной активностью объединяют, остальные отбрасывают. [c.284]


    Растворы гликогена, НАД+ и АДФ готовят на 0,05 М калий-фосфатном буфере, pH 7,4. [c.50]

    Калий-фосфатный буфер — 5 мМ раствор, pH 7,7. [c.283]

    Получение гомогената скелетных мышц крысы. Среда выделения-. калий-фосфатный буфер — 0,05 М раствор, pH 7,6 pH буфера проверяют на потенциометре или с универсальным индикатором буферным методом. Всю посуду перед работой необходимо охладить на льду. [c.49]

    Гликоген—1%-ный раствор, приготовлен на калий-фосфатном буфере 0,05 М, pH 7,4. [c.53]

    М калий-фосфатным буфером (pH 7,4) в 2 раза. При инкубации гликогена с экстрактом в качестве кофактора добавляют НАД+. [c.50]

    Получение экстракта мышц. Мышцы задних конечностей только что декапитированной крысы используют для получения экстракта, не содержащего митохондрий, как указано на с. 50. Экстракт можно долго хранить в замороженном виде его разливают по 1 мл в пробирки и замораживают. Для определения молочной кислоты используют экстракт в разведении 1 25 (разводят 0,1 М раствором калий-фосфатного буфера, pH 7,4). [c.28]

    Бычий сывороточный альбумин, 0,1%-ный раствор, приготовленный на 10 мМ калий-фосфатном буфере, pH 7,5. [c.277]

    Экстракт мышц без митохондрий (с. 50) перед опытом разбавляют 0,05 М калий-фосфатным буфером (pH 7,4) в 2 раза. [c.52]

    Экстракт мышц без митохондрий (с. 50) перед опытом разводят в два раза 0,05 М калий-фосфатным буфером, pH 7,4. Если экстракт хранился в замороженном виде, его размораживают перед опытом, проверяют pH и вдвое разбавляют буфером. [c.56]

    Ход работы. 1. Приготовление ферментного препарата. Для приготовления экстракта ткани 1—2 г печени гомогенизируют в гомогенизаторе или растирают в фарфоровой ступке со стеклянным песком в 2—3 мл 0,02 моль/л калий-фосфатного буфера. Затем разводят гомогенат тем же буфером в пропорции [c.54]

    Калий-фосфатный буфер — 0,4 М и 0,03 М растворы, pH 7,2. [c.172]

    ДЭАЭ-целлюлоза, уравновешенная 5 мМ калий-фосфатным буфером, pH 7,7 (с. 109). [c.283]

    Суспензию митохондрий (1,5 мг митохондриального белка) добавляли (точка М) к раствору, содержащему 0,,3 М маннит, ОмМ калий-фосфатный буфер, pH 7,2, 5 мМ Mg U и 10 мМ K I. После добавления в суспен.зию малата и АДФ устанавливается некоторая скорость поглощения кислорода. Очень четко проявляется контроль скорости дыхания со стороны АДФ. Отношение скоростей иоглощения кислорода в состояниях 4 и 3 называется коэффициентом дыхательного контроля (в данном случае он равен примерно 6). На основании полярографической записи можно рассчитать величину отношения АДФ О, которое эквивалентно отношению Р 0. Общий объем реакционной смеси 3 мл. [c.61]


    ДЭАЭ-целлюлоза, уравновешенная 2 мМ калий-фосфатным буфером, pH 7,6 (с. 109). [c.285]

    M Натрий-калий фосфатный буфер, pH 7,6 2D 1,0066 1,034  [c.415]

    М Мочевина в Vis М натрий-калий фосфатном буфере, pH 7,6 20 1,0994 1да  [c.415]

    М калий-фосфатным буфером pH 7,0. [c.173]

    Клетки, обработанные толуолом, готовят следующим образом. Пробы культуры по 1,0, 0,5 или 0,20 мл добавляют к 4,0, 4,5 или 4,8 мл 0,05 М калий-фосфатного буфера, pH 7,5, для получения разведений 1 5, 1 10 или 25 соответственно. Измерив оптическую плотность этих разведений, по калибровочной кривой можно оп- [c.400]

    Для определения белков с помощью флуорескамина к анализируемому препарату, растворенному в 2 мл 0,05 М калий-фосфатного буфера (pH 7), добавляют 10 мкл ацетонового раствора флуорескамин  [c.130]

    Содержание АТ-пар составит 100 — 51,75 = 48,25 моль %. Кривая плавления спирали РНК. На СФ-4 с помощью термостатированной камеры снимают кривую плавления РНК (см. стр. 116). Измерения оптической плотности препаратов РНК проводят в одном из следующих растворов 1) 0,1 М Na l с 0,01.М трис-НС1 буфер pH 7,0, 2) 0,01 М калий — фосфатный буфер pH 7,0, содержащий 0,001 М Mg (СНзСОО)г, 3) 0,1 X SS . [c.118]

    Колонку (2X15 см) заполняют густой суспензией гидроксилапатита так, как это описано на с. 102. Колонку промывают 100 мл 0,03 М фосфатного буфера. Затем в нее вносят препарат нуклеиновой кислоты из расчета 0,2 мг на 1 мл суспензии (сухие препараты растворяют в 0,03 М калий-фосфатном буфере, менее очищенные препараты предварительно освобождают от избытка ионов). Устанавливают скорость тока жидкости 0,2 мл/мин-см . Колонку промывают 50—100 мл исходного буфера и проводят элюцию в линейном градиенте концентрации фосфатного буфера 0,03—0,4 М. Общий объем элюента — 400 мл. Собирают фракции по 5—10 мл. Содержание нуклеиновых кислот определяют по поглощению при 260 нм. Порядок элюции нуклеиновых кислот с колонки гидроксилапатита при постепенном увеличении концентрации фосфатного буфера следующий РНК, однонитевая ДНК, двух-нитевая нативная ДНК. [c.172]

    Кристаллизация. Фракции, содержащие активность фермента, объединяют и добавляют к ним медленно, при перемешивании, 600 г/л сульфата аммония. После 30-минутного стояния осадок отделяют центрифугированием и растворяют в 20 мМ калий-фосфатном буфере, pH 6,5 до достижения

Приготовление буферных растворов pH


Составьте следующие решения
(1) 0,1 М уксусная кислота
(2) 0,1 М ацетат натрия (тригидрат) (13,6 г / л)
Смешайте в следующих пропорциях, чтобы получить требуемый pH [Pearse 1980]
.
ф. Том. 0,1 М уксусной кислоты Том. 0,1 М ацетата натрия
3,6 185 мл 15 мл
3,8 176 мл 24 мл
4.0 164 мл 36 мл
4,2 147 мл 53 мл
4,4 126 мл 74 мл
4,6 102 мл 98 мл
4,8 80 мл 120 мл
5,0 59 мл 141 мл
5,2 42 мл 158 мл
5.4 29 мл 171 мл
5,6 19 мл 181 мл

Приготовьте следующие решения 5
(1) 0,2M Kh3PO4 (г / л)
(2) 0,2 М NaOH
Добавьте об. 0,2 М NaOH в таблице до 50 мл 0,2 М Kh3PO4
и разбавить до 200 мл.
ф. Том. из Наох фот Том. NaOH
5,8 3,72 мл 7.0 29,63 мл
6.0 5,70 мл 7,2 35,00 мл
6,2 8,60 мл 7,4 39,50 мл
6,4 12,60 мл 7,6 42,80 мл
6,6 17,80 мл 7,8 45,20 мл
6,8 23,65 мл 8,0 46.80 мл
Здесь первичная соль является твердым веществом и весит в граммах.
Добавляют отмеренное количество 0,1 М HCl или NaOH и доводят
до 1 литра для получения требуемого ph. 4
pH Солевая смесь
Разбавьте каждую смесь до 1 литра раствора дистиллированной водой
3 10,21 г гидрофталата калия и 223 мл 0,10 М HCl
,21 4 100009 фталата водорода и 1 мл 0.10M HCl
5 10,21 г гидрофталата калия и 226 мл 0,10 M NaOH
6 6,81 г дигидрофосфата калия и 56 мл 0,10 M NaOH
7 ди 6,81 и 291 мл 0,10 M NaOH
8 6,81 г дигидрофосфата калия и 467 мл 0,10 M NaOH
9 4,77 г тетрабората натрия и 46 мл 0,10 M HCl
4 4 .77 г тетрабората натрия и 183 мл 0,10 М NaOH
11 2,10 г бикарбоната натрия и 227 мл 0,10 М NaOH
.

Буферные таблицы

Буферные таблицы Ниже приведены рецепты для ряда общих биологических буферов, взятых из Рузин, 1999 Plant Microtechnique и Microscopy . Выбирая буфер для конкретного приложения , выбирайте буфер на основе его оптимума pH и биологических свойств, а не исторического использования. Многие буферные виды оказывают влияние на биологические системы, ферментативную активность, субстраты или кофакторы (Perrin and Dempsey, 1974).Например, фосфатные буферы подавляют активность нескольких метаболических ферментов, включая карбоксилазу, фумаразу и фосфоглюкомутазу. Барбитурат препятствует окислительному фосфорилированию. Трис-буфер реагирует с первичными аминами и изменяет перенос электронов и фосфорилирование в хлоропластах. Трис также подавляет дыхательные ферменты в митохондриях. HEPES не обладает этими отрицательными эффектами, но буферизует при аналогичном диапазоне pH. MOPS и MES разлагаются при автоклавировании в присутствии глюкозы. Сохраняйте концентрацию буфера как можно более низкой, но достаточной для поддержания pH.

ГЛИЦИН – HCL; PH 2,2–3,6, ПК A = 2,35

Объедините 25 мл 0,2 М глицина и x мл HCl и разбавьте до 100 мл DI (Dawson, et al. , 1969).

x (мл) pH
22,0 2,2
16,2 2.4
12,1 2,6
8,4 2,8
5,7 3,0
4,1 3,2
3,2 3,4
2,5 3,6

АЦЕТАТ НАТРИЯ; PH 3.6–5,6, ПК А = 4,76

Смешайте следующие пропорции 0,1 N уксусной кислоты и 0,1 N ацетата натрия (Pearse, 1980).

уксусная кислота натрия ацетат pH
185 15 3,6
176 24 3.8
164 36 4,0
147 53 4,2
126 74 4,4
102 98 4,6
80 120 4,8
59 141 5.0
42 158 5,2
29 171 5,4
19 181 5,6

БУФЕРИРОВАННЫЙ СОЛИН (PBS, TBS, TNT, PBT)

Забуференные физиологические растворы часто используются при проведении экспериментов по иммунолокализации.Есть много вариаций. Здесь представлены три распространенных препарата (Mishkind, et al. , 1987).
PBS 20x в наличии ТБС
Хлорид калия 4 г 53,6 мм Калия хлорид 4 г
NaCl 160 г 274 мМ NaCl 160 г
Одноосновный фосфат калия 4 г 29.4 мм Трис-буфер (10 мМ, pH 7,5) на 1 литр
Двухосновный фосфат натрия (7 • h3O) DI 43,2 г от 17,5 мм до 1 литра Использовать TBS при проведении иммуноцитохимических исследований
эксперименты на тканях, чувствительных к фосфату
(обычно фотосинтетические ткани)
TNT PBT
NaCl 150 мМ PBS до объема
Трис-буфер (100 мМ, pH 7.5) на 1 литр Твин 20 1% (об. / Об.)

КАКОДИЛАТНЫЙ БУФЕР; PH 5,0–7,4, ПК A = 6,27

Какодилатный буфер натрия [Na (Ch4) 2 AsO2 • 3h3O] является альтернативой фосфатному буферу Соренсена. Обладает хорошей буферной способностью pH в диапазоне pH 5,0–7,4. Какодилат был введен для применения в электронной микроскопии Sabatini et al. (1962) как метод предотвращения добавления дополнительных фосфатов к препаратам образцов. Митохондрии и другие органеллы могут быть повреждены при подвергается воздействию высоких концентраций фосфатов, присутствующих в буферах Соренсена. Кроме того, какодилат не будет реагировать с альдегидными фиксаторами, как аминсодержащие буферы (, например, Tris). Его эффективность в фиксирующих растворах может быть результатом ингибирующего метаболизм эффекта арсената, а не какой-либо специальной буферной способности.

Подготовьте 0.2 М маточный раствор какодилата натрия в воде (4,28 г / 100 мл). Добавьте следующие количества 0,2 M HCl на 100 мл исходного раствора какодилата с последующим добавлением DI до конечного объема 400 мл, чтобы получить 0,05 M какодилатный буфер при желаемом pH (Dawes, 1971).
0,2 М HCl pH
94,0 5,0
90.0 5,2
86,0 5,4
78,4 5,6
69,6 5,8
59,2 6,0
47,6 6,2
36,6 6,4
26.6 6,6
18,6 6,8
12,6 7,0
8,4 7,2
5,4 7,4

«ХОРОШИЕ» БУФЕРЫ; ПК А = 6,15–8,06

Трис – HCl (pKa = 8.06) и малеат (pKa = 6,26) имеют рабочий диапазон pH 5,0–8,6 и могут успешно использоваться для буферизации окрашивающих растворов (, например, Toluidine Blue O). Однако избегайте триса с фиксаторами альдегидов или тетроксидом осмия, поскольку альдегиды вступают в реакцию с аминогруппой триса, что приводит к потере буферной способности. PIPES (pKa = 6.80) обычно используется в качестве буфера для удержания актиновых филаментов во время фиксации. Другие полезные биологические буферы включают HEPES (pKa = 7,55), MES (pKa = 6,15) и MOPS (pKa = 7.20) (Good, и др., , 1966; Perrin, Dempsey, 1974).

ЦИТРАТНЫЙ БУФЕР; PH 3,0–6,2, PK A = 6,40 Цитратный буфер (Gomori, 1955) исходные растворы: A : 0,1 М лимонная кислота; B : 0,1 М цитрат натрия. Используйте x мл A + y мл B и разбавьте до 100 мл 50 мл DI.

0,1 М лимонная кислота 0,1 М цитрат натрия pH
46.5 3,5 3,0
43,7 6,3 3,2
40,0 10,0 3,4
37,0 13,0 3,6
35,0 15,0 3,8
33,0 17.0 4,0
31,5 18,5 4,2
28,0 22,0 4,4
25,5 24,5 4,6
23,0 27,0 4,8
20,5 29,5 5.0
18,0 32,0 5,2
16,0 34,0 5,4
13,7 36,3 5,6
11,8 38,2 5,8
9,5 41,5 6,0
7.2 42,8 6,2

ФОСФАТНЫЙ БУФЕР СЁРЕНСЕНА; PH 5.8–8.0 , PK A = 7.20

Смешайте соответствующие объемы бульона и добавьте равный объем дистиллированной воды, чтобы получить конечный 0,1 М фосфатный буферный раствор Соренсена (Sørensen, 1909; Gomori, 1955). Имейте в виду, что высокий уровень фосфата может быть несколько токсичным для растительных клеток (Sabatini, et al., 1962), и поэтому буфер Соренсена может не подходить для некоторых экспериментов.

Базовые растворы: A 0,2 M Nah3PO4 B 0,2 M Na2HPO4

A (мл) B (мл) pH
92,0 8,0 5,8
87,7 12.3 6,0
81,5 18,5 6,2
68,5 31,5 6.5
62,5 37,5 6,6
56,5 43,5 6,7
51,0 49.0 6,8
45,0 55,0 6,9
39,0 61,0 7,0
33,0 67,0 7,1
28,0 72,0 7,2
23,0 77.0 7,3
19,0 81,0 7,4
16,0 84,0 7,5
8,5 91,5 7,8
5,3 94,7 8,0

ФОСФАТНО-ЦИТРАТНЫЙ БУФЕР; PH 2.2–8,0, ПК А = 7,20 / 6,40

Добавьте следующее, чтобы создать 100 мл фосфатно-цитратного буферного раствора. Стандартные решения

0,2 М двухосновного фосфата натрия; 0,1 М лимонной кислоты (Pearse, 1980).

0,2 M Na2HPO4 (мл) 0,1 М цитрат (мл) pH
5.4 44,6 2,6
7,8 42,2 2,8
10,2 39,8 3,0
12,3 37,7 3,2
14,1 35,9 3,4
16.1 33,9 3,6
17,7 32,3 3,8
19,3 30,7 4,0
20,6 29,4 4,2
22,2 27,8 4,4
23.3 26,7 4,6
24,8 25,2 4,8
25,7 24,3 5,0
26,7 23,3 5,2
27,8 22,2 5,4
29.0 21,0 5,6
30,3 19,7 5,8
32,1 17,9 6,0
33,1 16,9 6,2
34,6 15,4 6,4
36.4 13,6 6,6
40,9 9,1 6,8
43,6 6.5 7,0

БАРБИТАЛЬНЫЙ БУФЕР; PH 6,8–9,2, ПК A = 7,98

Добавьте следующее, чтобы создать 200 мл буферного раствора. К 50 мл 0.2 М барбитал натрия (Веронал,

41,2 г в 1000 мл) добавляют x мл 0,2 М HCl для создания буферного раствора и разбавляют до 200 мл с помощью DI (Gomori, 1955).

0,2 M HCl (мл) pH
1,5 9,2
2,5 9,0
4,0 8.8
6.0 8,6
9,0 8,4
12,7 8,2
17,5 8,0
22,5 7,8
27,5 7,6
32,5 7,4
39.0 7,2
43,0 7,0
45,0 6,8

Трис-буферы обычно используются в микротехнике, включающей молекулярно-биологические процедуры. Здесь перечислены некоторые распространенные составы Триса (Maniatis, et al. , 1982).

Решение Препарат
Трис, 1 М в наличии Трис-основание DI Растворите и отрегулируйте pH с помощью следующего приблизительного количества HCl: pH 7.4 pH 7,6 pH 8,0 121,1 г 800 мл 70 мл 60 мл 42 мл
ЭДТА, 0,5 M Динатрий этилендиаминтетраацетат. Довести pH до прибл. 8.0 и перемешать до растворения 186,1 г
SSC, 20x NaCl NaCitrate DI. Довести pH до 7,0 с помощью NaOH, затем добавить DI до 1 литра 175,3 г 88,2 г 800 мл
SSPE, 20x NaCl Nah3PO4 • h3O EDTA DI Отрегулируйте pH до 7.4 с NaOH, затем добавить DI в 1 литр 174 г 27,6 г 7,4 г 800 мл
TE Трис ЭДТА Отрегулируйте pH, используя исходный раствор Трис 10 мМ 1 мМ
STE (TNE) Tris NaCl EDTA Довести pH до 8,0, используя исходный раствор Tris 10 мМ 100 мМ 1 мМ

ГЛИЦИН - НААН БУФЕР; PH 8.6–10,6 , ПК А = 9,78

Соедините 25 мл исходного раствора глицина с x мл 0,2 М NaOH и разбавьте DI, чтобы получить раствор 100 мл (Pearse, 1980).

0,2 М NaOH pH
2,0 8,6
3,0 8,8
4.4 9,0
6.0 9,2
8,4 9,4
11,2 9,6
13,6 9,8
19,3 10,4
22,75 10,6
.

Физиологический раствор с фосфатным буфером | Протоколы онлайн

Содержание
  1. Подготовка
  2. Ссылки

Забуференный фосфатом физиологический раствор (сокращенно PBS) - это буферный раствор, обычно используемый в биологических исследованиях. Это соленый раствор, содержащий хлорид натрия, фосфат натрия и (в некоторых составах) хлорид калия и фосфат калия. Буфер помогает поддерживать постоянный pH. Осмолярность и концентрация ионов в растворе обычно соответствуют таковым в организме человека (изотонический).

.

Смотрите также